消化之前
- 确认培养状态符合来源特异性传代条件或已验证的本地基线。
- 检查形态、分布、碎屑、培养基和异常脱落细胞。
- 在暴露细胞之前准备好标签、容器、培养基、消化液和终止材料。
- 记录支持本次传代决定的观察。
消化和吹打过程中
使用该来源细胞已验证的清洗和消化方法,通过观察判断脱落,不要只依赖固定计时。过度暴露、强烈吹打或长时间保持单细胞悬液都可能降低恢复或改变细胞群体。
如果某批细胞持续需要不同处理,应记录证据并验证改变,而不是每次悄悄修改流程。
计算并记录新的起始条件
记录计数方法、稀释、必要时的活率、目标密度、生长面积、容器数量、细胞悬液浓度和最终体积。整个计算过程应保留单位。
采用既能保持悬液均匀、又不造成不必要机械应激的方法混匀,并及时一致地完成分配。
在预先规定的时间检查恢复
在固定的接种后时间检查贴附、分布和形态。只看更晚终点可能掩盖早期贴附不良后发生的选择性存活。
恢复偏离基线时,先回顾传代前状态、消化暴露、悬液质量、接种计算、容器准备和返回培养环境的过程,再考虑改变多个下游条件。